1. 融化后的感受態細胞應及時進行轉化,以免降低轉化效率;融化后不宜再次凍結保 存。 2. 整個操作過程要輕柔,避免移液槍吹吸。 3. 請使用傳熱性能好的薄壁試管或離心管,換用不同的試管或離心管時,應摸索熱激時 間,以獲得最佳轉化效率。 4. 請保留剩余的連接反應液,以便在轉化實驗不成功時重新進行轉化。 經驗表明,使用 SOC 培養基復蘇比使用 LB 培養基復蘇的轉化效率高約一倍以上。
DNA 轉染優化方案 為達到高轉染效率和低細胞毒性的最佳效果,可以對 DNA 和轉染試劑的比例及轉染 初始細胞密度進行優化。比如要確保細胞在轉染時匯合度大于 90%,DNA (μg): PolyproFect 試劑 (μl) 的比值在 1:1 到 1:4 范圍內。 擴大或減小轉染規模 在不同培養容器中,轉染時培養基、DNA/RNA 和 PolyproFect 用量,請參考下表。 對于自動化,高通量轉染,建議在 96 孔板中加入 50µl 復合物。注意:如果想將細胞直接 加入到轉染復合物中來進行快速 96 孔板轉染。在板中制備復合物,直接加入兩倍于通用 實驗方案所建議的細胞數量,總體積仍為 100ul。在復合物存在的情況下,細胞仍可貼壁。培養容器培養表面積 (cm2)培養基體積稀釋培養基體積DNA 轉染 DNAPolyproFect 試劑96孔板0.3100 µl2 × 25 µl0.2 µg0.5 µl24孔板2500 µl2 × 50 µl0.8 µg2.0 µl12孔板41 ml2 × 100 µl1.6 µg4.0 µl6孔板102 ml2 × 250 µl4.0 µg10 µl6cm培養皿205 ml2 × 500 µl8.0 µg20 µl10cm培養皿6010 ml2 × 1.5 ml24 µg60 µl
一、液體樣品 1. 將約 2 μL 液體樣品(如全血、細胞培養液、病毒樣品、糞便樣品)加入到 50 μL 免 提取核酸釋放劑中。(注意:總液體樣品用量不要超過本產品用量的 1/10。) 2. 室溫放置 3 分鐘;對于較難裂解的樣品(如有厚壁的真菌等),則保溫時間可以延長 到 10-30 分鐘。 3. 簡短振蕩混勻后取樣品裂解液直接進行 PCR 擴增或其他擴增。(注:裂解液體積最好不要超過反應體積的 1/10,對 50μL 的擴增體系,加入的裂解液不要超過5μL。由于不同的擴增體系成分不同,建議做梯度測試以確定最佳反應體系)二、組織樣品 1. 將或 2 mg 的固體樣品(如動物組織、植物葉片、種子等)加入到 50 μL 免提取核酸 釋放劑中。 (注意:總樣品量不要超過 1 mg/10 μL 的比例。) 2. 95℃加熱 5 分鐘;對于較難裂解的樣品(如石蠟組織切片、血斑等),則保溫時間可 以延長到 10-30 分鐘。 3. 簡短振蕩混勻后取樣品裂解液直接進行 PCR 擴增或其他擴增。 (注:裂解液體積最好不要超過反應體積的 1/10,對 50μL 的擴增體系,加入的裂解液不要超過 5μL。由于不同的擴增體系成分不同,建議做梯度測試以確定最佳反應體系)
本產品供科學研究和生產使用,用于組織和細胞的體外培養。禁止臨床使用。
應用領域:基因組學,蛋白質組學,細胞組學,免疫檢測,代謝組學,生物制藥研究與開發以及其他常用的高通量移液過程.
1、TAE 和 TBE 導電性能存在差異,如需縮短電泳時間,可選用 TAE 電泳緩沖液。 2、染料無需低溫冷藏,請于室溫下儲存,以避免沉淀,若發現沉淀,請將染料加熱至 45- 50℃,2 min,振蕩溶解,不影響使用效果。 3、本產品可以用來染色單鏈 DNA 和 RNA,但它對單鏈 DNA 或 RNA 的靈敏度低于雙鏈 DNA。