1、Buffer BL 的加入能夠改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和穩定性,消除高 溫潮濕或其他不良環境因素對吸附柱造成的影響。 2、 使用前請先檢查 Buffer BL、Buffer GN 是否出現渾濁,如有混濁現象,可在 37℃水浴 中加熱幾分鐘,即可恢復澄清。 3、 溶液 Buffer GN 含有 pH 指示劑,黃色,指示 pH≤7.5。 ? 切膠時,紫外照射時間應盡量短,以免對 DNA 造成損傷。 4、 回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關,初始量越少、洗脫體積越小,回收率越低。
1、 Buffer BL 的加入能夠改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和穩定性,消除高 溫潮濕或其他不良環境因素對吸附柱造成的影響。 2、 使用前請先檢查 Buffer BL、Buffer PB 是否出現渾濁,如有混濁現象,可在 37℃水浴 中加熱幾分鐘,即可恢復澄清。 3、溶液 Buffer PB 含有 pH 指示劑,黃色,pH≤7.5。 4、 回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關,初始量越少、洗脫體積越小,回收率越低。
1、如溶液產生沉淀,使用前應先將試劑盒內的溶液在室溫中放置一段時間,必要時可在 37℃水浴溶解,用后及時將瓶蓋蓋緊; 2、所有操作都應在室溫進行,操作過程中應注意防護,不要將溶液濺到皮膚上,眼睛 里; 3、如下一步實驗要求較高,則應盡量使用 TAE 電泳緩沖液,電泳時最好使用新的電泳緩 沖液,以免影響電泳和回收效果; 4、切膠時,紫外照射時間應盡量短,以免對 DNA 造成損傷; 5、 如果回收率較低,可在膠充分溶解后檢測 pH 值,如 pH 值大于 7.5,可向含有 DNA 的膠溶液中加 10 ~ 30 µl 3 M 醋酸鈉(pH5.0)將 pH 值調到 5 ~ 7 之間。 6、回收10 kb 的 DNA 片段時,應加大溶膠液的體積,延長吸附和洗脫的時 間。 7、回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關,初始量越少、洗脫體積越少,回收率越低。
1. 切膠:用干凈刀片將目的 DNA 條帶切下,盡量切除不含 DNA 的凝膠。(注意:紫外線對 DNA 片段有損壞作用,切膠要迅速,避免長時間照射,同時做好眼睛及皮膚的防 護) 2. 稱重:將切下的含有目的 DNA 條帶的凝膠切成小塊,放入 2 ml 塑料離心管中,稱 重。(注意:先稱一個空的 2 ml 離心管的重量,放入凝膠塊后再稱一次,兩次重量相減得到凝膠的重 量) 3. 溶膠:加入等體積 Buffer GN,60℃水浴,每隔 2-3 min 上下振蕩,直到凝膠完全溶解。加入等體積的異丙醇混勻,再加入 10μl 磁珠混勻 5 分鐘。(注意:如凝膠重量為 100 mg,其體積可視為 100 μl,則加入 100 μl Buffer GN;如凝膠濃度大于 2%,所用溶膠液體積加倍) 4. 將離心管置于磁力架上靜置 1 min,磁珠完全吸附后,吸去液體。 5. 將離心管從磁力架上取下,加 600 μl Buffer W2,旋渦充分混勻 30 s。(注意:Buffer W2 在使用前按要求加入無水乙醇,用后應立即蓋緊瓶蓋,以防乙醇揮發)6. 將離心管置于磁力架上靜置 1 min,磁珠完全吸附后,吸去液體。 7. 將離心管置于磁力架上,開蓋室溫放置 5-10min。 (注意:乙醇殘留會抑制后續的酶反應,所以晾干時要確保乙醇揮發干凈。但也不要干燥過度,以 免 DNA 難以洗脫) 8. 將離心管從磁力架上取下,加入 30-50 μl Buffer EB,充分震蕩 1-2 min。 9. 將離心管置于磁力架上靜置 1 min,磁珠完全吸附后,小心將溶液轉移至新的離心管 中,并于適當條件保存。(注意:為增加洗脫效率,可將洗脫液在 60℃預熱。如需使用去離子水洗脫,可用 NaOH 調整其 pH 值在 7.0 - 8.5 ...
1. 估計 PCR 反應液或酶切反應液的體積,向其中加入等體積溶液 Buffer GN,充分混 勻(無需去除石蠟油或礦物油)。加入等體積的異丙醇混勻,再加入 10ul 磁珠混勻 5min。(注意:對于回收小于 150bp 的小片段可將溶液 Buffer GN 的體積增加到 3 倍以提高回收率;溶液 混勻后應呈現黃色。如果溶液的顏色為桔紅色或紫色,請使用 10 ul 3M 乙酸鈉(pH 5.0)將溶液的 顏色調為黃色后再進行后續操作。) 2. 將離心管置于磁力架上靜置 1 min,磁珠完全吸附后,吸去液體。 3. 將離心管從磁力架上取下,加 600 ul Buffer W2,旋渦充分混勻 30 s。(注意:Buffer W2 在使用前按要求加入無水乙醇,用后應立即蓋緊瓶蓋,以防乙醇揮發) 4. 將離心管置于磁力架上靜置 1 min,磁珠完全吸附后,吸去液體。 5. 將離心管置于磁力架上,開蓋室溫放置 5-10min。 (注意:乙醇殘留會抑制后續的酶反應,所以晾干時要確保乙醇揮發干凈。但也不要干燥過度,以 免 DNA 難以洗脫)6. 將離心管從磁力架上取下,加入 30 ~ 50 ul Buffer EB,充分震蕩 1-2 min。7. 將離心管置于磁力架上靜置 1 min,磁珠完全吸附后,小心將溶液轉移至新的離心管 中,并于適當條件保存。 (注意:為增加洗脫效率,可將洗脫液在 60℃預熱。如需使用去離子水洗脫,可用 NaOH 調整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之間)